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多(duō)肽的保存

多(duō)肽一般是以冻干粉的形式保存,其在-20℃很(hěn)稳定,特别是冷冻干燥后并保存于-20℃干燥器中(zhōng),大多(duō)数肽在此温度下可(kě)以存放几年不变。如果一次使用(yòng)的肽量不多(duō),最好分(fēn)装(zhuāng)成几个小(xiǎo)包装(zhuāng),取用(yòng)更為(wèi)方便。

為(wèi)减少湿度的影响,在将冻干肽暴露于空气之前,应先将其在干燥的条件下恢复至室温。当无法冷冻干燥时,最好的方法是以较小(xiǎo)的样量存放,并尽快使用(yòng)。   

对于含Met,CysTrp的多(duō)肽,脱氧缓冲剂对其保护必不可(kě)少,因為(wèi)这种多(duō)肽易被空气氧化,比较好的解决方法是可(kě)以在封瓶前,慢慢通入氮气或氩气流从而降低氧化作(zuò)用(yòng),没有(yǒu)条件的建议-80度干燥冻存。

GlnAsn的多(duō)肽也容易降解,所以相对于其他(tā)不含此类氨基酸的多(duō)肽,其保存期较短。

 

二、多(duō)肽的溶解

溶解肽是一个很(hěn)重要的环节。如果溶解不当可(kě)能(néng)导致肽损失或者实验失败。肽的溶解性主要取决于肽的序列,所以,,设计多(duō)肽时要加注意,肽序列中(zhōng)建议应包含20%的带電(diàn)残基以增加其溶解度。   

在使用(yòng)之前,客户可(kě)以遵循以下三个基本原则来选择合适的溶剂溶解多(duō)肽。

首先,所选溶剂一定能(néng)充分(fēn)溶解多(duō)肽;其次,所选溶剂能(néng)与实验条件兼容;最后,所选溶剂不能(néng)与肽反应,也不能(néng)使肽降解。

只要肽的量允许,可(kě)以先用(yòng)少部分(fēn)肽溶解,然后再将全部样品溶解。如果需要从溶剂中(zhōng)回收肽,可(kě)以选择 一种初始溶剂使其在冻干后容易去除。   

以下建议或许对您溶解肽有(yǒu)所帮助:   

1. 少于5个氨基酸的肽一般溶于水溶液,强疏水的氨基酸(W,I,L,F,M,V,Y)除外。   

2. 如果带電(diàn)氨基酸平均分(fēn)布于全部序列中(zhōng),那么含有(yǒu)>25%带電(diàn)氨基酸(E,D,K,R,H)的亲水肽和含有(yǒu)<25%疏水氨基酸的肽一般都能(néng)溶于水溶液。多(duō)肽的纯化系统一般為(wèi)0.1%TFA/水和0.1%TFA/ ACN。因此,如果肽溶解在没有(yǒu)缓冲能(néng)力或者缓冲能(néng)力很(hěn)弱的缓冲液中(zhōng),结果可(kě)能(néng)导致肽溶液呈酸性。在使用(yòng)别的方法溶解肽时務(wù)必使溶剂的pH值近乎中(zhōng)性。酸性肽(E+D残基数多(duō)于K+R+H残基 数)和碱性肽(K+R+H残基数多(duō)于E+D残基数)在中(zhōng)性pH值条件下比在酸性pH值下更易于溶解。  

3. 对于疏水氨基酸含量為(wèi)50%~75%的肽,即使序列中(zhōng)含有(yǒu)>25%带電(diàn)氨基酸也有(yǒu)可(kě)能(néng)不溶于水或者部分(fēn)溶解。最好先把肽溶于最少量的强有(yǒu)机溶剂如DMF、ACN、异丙醇、乙醇、乙酸、4-8M GdnHCl、 尿素,或者DMSO(序列中(zhōng)没有(yǒu)C,W,M时),及其它类似的有(yǒu)机溶剂中(zhōng)。最好将溶解肽的有(yǒu)机溶 剂缓慢地逐滴加入水溶液中(zhōng),如果溶液变浑浊,可(kě)能(néng)是达到了溶解极限,继续溶解就没什么用(yòng)了。 需要注意的是,最开始选择的溶剂应该与实验系统兼容。   

4. 疏水氨基酸含量>75%的强疏水肽一般也不溶于水溶液。此类肽也应该先用(yòng)强有(yǒu)机溶剂(如TFA,甲酸)溶解,如果将其加入到水溶液中(zhōng)也可(kě)能(néng)产(chǎn)生沉淀。最后的肽溶液可(kě)能(néng)需要高浓度的有(yǒu)机溶剂使之变性,而有(yǒu)机溶剂一般不用(yòng)于活细胞的生物(wù)功能(néng)研究。   

5. S,T,E,D,K,R,H,N,Q,Y含量高(>75%)的多(duō)肽序列容易形成多(duō)余的分(fēn)子间氢键网络, 在浓的水溶液中(zhōng)容易形成凝胶。此类肽可(kě)以用(yòng)步骤3所述方法溶解。為(wèi)了减少溶解中(zhōng)可(kě)能(néng)出现的问题,建议客户从设计上和序列上多(duō)加考虑,以改善肽的溶解度。