一、多(duō)肽的纯度

多(duō)肽的纯度是指HPLC方法在214nm处检测到的目标多(duō)肽的含量(214nm是肽链的吸收波長(cháng))，紫外分(fēn)光光度计检测不到水和残留的盐份。可(kě)发现其他(tā)的杂质(zhì)包括：缺失序列（缺失了一个或多(duō)个氨基酸残基的靶序列），截断序列（加帽过程中(zhōng)产(chǎn)生的序列）脱保护不完全序列（产(chǎn)生于整个合成过程或最后的裂解过程）。

多(duō)肽纯化不涉及水和盐。HPLC纯化会产(chǎn)生少量的TFA，如：游离的氨基末端和其他(tā)侧链如Arg、Lys、His都可(kě)生成少量TFA杂质(zhì)。通常交付的多(duō)肽多(duō)含有(yǒu)微量TFA和残留水。即使处于冻干状态，水也会因共价结合的能(néng)力不同而不同程度地存在着。

在多(duō)肽中(zhōng)还存在哪些其他(tā)物(wù)质(zhì)(杂质(zhì))?

纯化前的多(duō)肽中(zhōng)包含的杂质(zhì)包括多(duō)肽和非多(duō)肽物(wù)质(zhì), 纯化后的多(duō)肽中(zhōng)包含的杂质(zhì)除了TFA盐，大多(duō)数為(wèi)序列被修改的多(duō)肽。

1、缺失了一个或多(duō)个氨基酸残基的靶序列

2、為(wèi)避免缺失序列的产(chǎn)生而进行的加帽操作(zuò)，截断序列即产(chǎn)生于加帽过程中(zhōng)产(chǎn)生于整个合成过程或最后的裂解过程

3、保护基重新(xīn)附着在多(duō)肽的其他(tā)位置

二、多(duō)肽净含量

肽净含量不同于多(duō)肽纯度，多(duō)肽纯度仅指多(duō)肽本身所含肽产(chǎn)品的含量及杂质(zhì)的含量，不包括水份等杂质(zhì)。而多(duō)肽含量则是指样品中(zhōng)肽类物(wù)质(zhì)相对于非肽类物(wù)质(zhì)所占的百分(fēn)比。通常一条多(duō)肽产(chǎn)品中(zhōng)除了多(duō)肽本身还包括生产(chǎn)过程中(zhōng)带入的非盐组份，如水，被吸收的溶剂、配位离子和盐等。即使在严格的冻干状态下，也会吸收微量的水。因此一条多(duō)肽即使纯度达到99%，因為(wèi)产(chǎn)品中(zhōng)还包含水份及有(yǒu)机盐分(fēn)等，它的含量可(kě)能(néng)也只有(yǒu)70-80%。因纯化批次和冻干工(gōng)艺不同，也会导致肽的净含量有(yǒu)所不同。一般我们可(kě)以用(yòng)N元素分(fēn)析或氨基酸分(fēn)子的方法来检测多(duō)肽的净含量。如果多(duō)肽序列中(zhōng)有(yǒu)Trp或Tyr可(kě)以采用(yòng)紫外的方法分(fēn)析肽含量，根据摩尔消光系数：

Tryptophan 5560 AU/mmole/ml

Tyrosine 1200 AU/mmole/ml

（at 280 nm at neutral pH using a 1-cm cell）

一条多(duō)肽的摩尔消光系数可(kě)以根据每个Trp或Tyr的系数进行加和，然后根据所测到的在280nm处的吸收值通过公(gōng)式进行计算

mg peptide per ml = (A280 x DF x MW) / e

A280   在280 nm实际吸收值（1-cm cell）,

DF   是稀释因数, MW 多(duō)肽分(fēn)子量

e     多(duō)肽的摩尔消光系数